Häufig verwendete Antikörper

Vimentin ist das Zytoskelettprotein von mesenchymalen Zellen einschließlich Fibroblasten, Chondrozyten, Osteozyten, Endothelien und weißen Blutkörperchen. Es wird generell in Sarkomen gebildet und wird als übergeordneter Marker für Weichgewebstumoren eingesetzt. Vimentin ist ein Intermediärfilamentprotein vom Typ III (zu dieser Gruppe gehören auch Desmin und das saure Gliafaserprotein GFAP).

Allerdings zeigen auch entdifferenzierte Karzinome eine Expression von Vimentin, dann meist mit einer zumindest partiellen Koexpression von Zytokeratinen. Diagnostisch verwertbar ist die Koexpression von Zytokeratin und Vimentin (eine passende konventionelle Histologie vorausgesetzt) bei

• Nierenzellkarzinomen
• Endometriumkarzinomen
• Synovialissarkomen
• epitheloiden Sarkomen

Das CD34-Antigen ist ein membranständiges Protein mit einem Molekulargewicht von 116 kD. Es wird in unreifen hämatopoetischen Stammzellen gebildet. Dieses Antigen und wird auch genutzt, um hämopoetische Stammzellen aus dem peripherem Blut für eine Stammzelltransplantation anzureichern. Daneben wird das CD34-Antigen auch auf Kapillarendothelien und in embryonalen Fibroblasten gebildet. Mit zunehmender Reifung verschwindet die Expression von CD34.

Eine CD34-Expression wird in undifferenzierten Leukämien, akuten myeloischen Leukämien und akuten lymphoblastischen Leukämien gefunden. Unter den Weichgewebstumoren reagieren insbesondere Gefäßtumoren mit diesem Marker. U.a. zeigt auch das Kaposi-Sarkom eine CD34-Positivität.

Daneben eignet sich der Marker auch für die Darstellung von Kapillarendothelien zum Beweis einer Lymph- oder Hämangiosis carcinomatosa.

Bestimmte weitere seltene Weichgewebstumoren sind ebenfalls CD34-positiv. Dazu gehören

• das Dermatofibrosarcoma protuberans,
• der solitäre fibröse Tumor,
• das Spindelzelllipom
• die gastrointestinalen Stromatumoren,
• maligne periphere Nervenscheidentumoren und
• epitheliode Sarkome.

In der Kombination mit CD31, einem Antigen mit hoher Spezifität für eine vaskuläre Differenzierung, erreicht man eine gute Absicherung einer entsprechenden Histogenese.

S100 stellt eine Gruppe von relativ kleinen Proteinen dar, die als gemeinsame Eigenschaft Kalzium-Ionen binden und dann in Abhängigkeit von der intrazellulären Kalzium-Konzentration andere Proteine (u.a. Proteinkinasen) aktivieren. Sie sind somit an der Signaltransduktion von Kalzium-abhängigen Signalwegen beteiligt. Der Name dieser Proteinfamilie leitet sich von der Eigenschaft ab, dass diese Proteine in 100% gesättigter Ammoniumsulfat-Lösung löslich bleiben, während andere Proteine ausfallen.

Auf Grund der geringen Größe der S100-Proteine ist eine Formalinfixierung zur Darstellung im Gewebe notwendig. Aus Kryostatschnitten und unzureichend fixiertem Gewebe kann es heraus gewaschen werden.

S100-Proteine findet sich in Glia und Ependymzellen des ZNS. Auch die Glia der peripheren Nerven, also die Schwannschen Zellen färben sich an. Entsprechend findet man eine Positivität für S100 in Tumoren, die sich von diesen Geweben ableiten. Zusätzlich sind Melanozyten sowie melanozytäre Tumoren S100-positiv. Bei malignen Melanomen findet sich meist auch dann noch eine S100-Positivität, wenn andere melanozytäre Marker auf Grund einer fortschreitenden Entdifferenzierung nicht mehr gebildet werden.

Speicheldrüsentumoren und Tumoren der ekkrinen Schweißdrüsen zeigen häufig ebenfalls eine Expression von S100.

Synaptophysin, Chromogranin A, NSE, CD56

Synaptophysin ist ein Protein, das in neuroendokrinen Zellen gebildet wird. Eine Expression findet sich auch in Tumoren, die sich von den neuroendokrinen Zellen ableiten. Diese findet man im Gastrointestinaltrakt, im Pankreas, der Lunge, Schilddrüse und der Hypophyse. Auch die Zellen des Nebennierenmarks und der Paraganglien reagieren positiv.

Das Chromogranin A (CgA) färbt eine ähnliche Palette von Geweben, genauso wie die Neuronen-spezifische Enolase (NSE), die auch zusätzlich in neuronalen Geweben gefunden wird.

CD56 entspricht dem neuronalen Zelladhäsionsmolekül (NCAM). Es ist ein sehr sensitiver Marker einer neuroendokrinen Differenzierung und wird entsprechend seiner Funktion als Adhäsionsmolekül an der Zelloberfläche membranös exprimiert. Es wird auch in nasalen T/NK-Zell-Lymphomen exprimiert.

Der Antikörperklon HMB45 färbt ein zytoplasmatisch lokalisiertes Antigen (gp100) in Melanozyten und melanozytären Tumoren an. Das Antigen repräsentiert eine Komponente der melanosomalen Oxidoreduktasen und ist somit Melanosomen-spezifisch. HMB-45 lässt sich in ca. 85% der malignen Melanome nachweisen, wobei aber die Untergruppe der desmoplastischen Melanome in weniger als 10 % positiv sind.

Eine HMB-45-Positivität wird auch in Angiomyolipomen, Klarzelltumoren der Lunge und in der Lymphangioleiomyomatose gefunden.

Nävi und ruhende Melanozyten sind in der Regel negativ.

Her2 ist eine der typischen molekularbiologischen Abkürzungen, deren Herkunft sich meist kaum noch rekonstruieren lässt. Es steht für human epidermal growth receptor 2. Her2/neu ist ein membranständiger Rezeptor, der auf der Oberfläche von Tumorzellen überexprimiert werden kann. Der Rezeptor gehört zu den Tyrosinkinase-Rezeptoren, d.h. die intrazelluläre Domäne besitzt eine enzymatische Aktivität, die Phosphatgruppen an Tyrosinreste der intrazellulären Effektormoleküle koppelt (Tyrosinkinase-Aktivität). Her2/neu wird vom c-erbB2-Gen (c-erbB2 steht für cellular avian erythroblastosis homologue B2) kodiert und entspricht einem viralen Onkogenhomolog, das bei Vögeln eine Leukämie hervorruft..
Die häufigste (und fast alleinige) Ursache einer Her2/neu-Überexpression in Mamma-karzinomen ist eine Vervielfältigung
( Gen-Amplifikation) des c-erbB2-Gens, d.h. das Gen liegt in mehr als 2 Kopien im Zellkern vor. Die c-erbB2-Amplifikation und die konsekutive Her2/neu-Überexpression ist mit einer schlechteren Prognose bei Mammakarzinomen assoziiert. Gleichzeitig stellt aber Her2/neu ein therapeutisches Zielprotein dar. Mit einem humanisierten Antikörper (d.h. einem Antikörper, der vom menschlichen Immunsystem nicht als körperfremd erkannt wird) gegen Her2/neu können überexprimierende Tumorzellen bekämpft werden. In der Tat stellen die Studien zur Behandlung mit dem Antikörper seit sehr langer Zeit die ersten Therapieergebnisse dar, die in einer verlängerten Überlebenszeit bei Mammakarzinomen resultierten. Zudem gibt es Studien, die bei Her2/neu-Überexpression ein längeres krankheitsfreies Überleben und eine längere Gesamtüberlebenszeit nach einer speziellen Chemotherapie zeigen.

Die Indikation für die Herceptin-Therapie ist auf stark überexprimierende Tumoren beschränkt, bei mäßig überexprimierenden Karzinomen muss eine entsprechende Genamplifikation nachgewiesen werden. Die Genamplifikation wird durch die Fluoreszenz-in-situ-Hybridisierung (FISH) dargestellt. Aufgrund der besseren Verfügbarkeit erfolgt der Her2/neu -Nachweis meist immunhistologisch. Die Färbung erfolgt mit einem Färbekit der Firma DAKO, der von der amerikanischen FDA als einziges immunhistologisches Verfahren zugelassen ist, aber auch ausgesprochen teuer ist. Trotzdem ist FISH die validere Methode, über die Behandlungsindikation zu entscheiden.

Auswertung

Das Färbeergebnis wird als vierstufiger Score von “0” bis “3+” mitgeteilt. Für den Score
werden die

• Stärke der Färbung,
• die Anzahl der positiven Zellen und
• die Qualität/Lokalisation des Signals bewertet.

Berücksichtigt werden ausschließlich Färbesignale der Zellmembran. Es wird dann zunächst entschieden, ob mehr oder weniger als 10% der Tumorzellen angefärbt sind. Jede Markierung, die weniger als 10% der Tumorzellen betrifft, wird als negativ (Score 0) bewertet. Ein weiteres übergeordnetes Kriterium bei der Auswertung ist, ob die Färbung die Zellmembran in der vollen Zirkumferenz markiert oder nur teilweise anfärbt.  Schließlich wird die Färbeintensität bewertet. Der Entscheidungsbaum ist im Folgenden abgebildet. Zur Reduktion falsch positiver Ergebnisse ist der Score 3+ seit 2008 auf Fälle beschränkt, bei denen mindestens 30% der Zellen eine starke zirkumferentielle Anfärbung zeigen. Fälle mit 10 bis 30% stark positiver Zellen werden nach 2+ klassifiziert. Diese Änderung ist Teil der aktuellen S3-Leitlinien zum Mammakarzinom.

Schlussfolgerung:

Bei einem negativem Ergebnis im Primärtumor sollte man auch Gewebe aus Metastasen oder dem Rezidiv gewinnen und untersuchen, insbesondere wenn sie metachron auftreten, denn diese könnten eine starke Überexpression aufweisen und mit der Herceptin-Therapie werden genau diese Tumormanifestationen behandelt. Dabei sollte auch bedacht werden, dass die Fluorezenz-in-situ-Hybridisierung sehr gut geeignet ist, auch an Feinnadelpunktaten aus einer Metastase eine Genamplifikation nachzuweisen.

p53 ist ein Tumorsuppressorgen mit einem Molekulargewicht von 53 kD. Das Gen von p53 ist auf dem kurzen Arm des Chromosom 17 lokalisiert. Das Genprodukt ist nukleär lokalisiert und stellt ein zentrales Protein der Zellzykluskontrolle dar. Die zentrale Funktion von p53 ist es, Zellen, die genetische Schäden aufweisen, nicht mehr zur Vermehrung zuzulassen. Diese Zellen gehen dann durch Apoptose zugrunde. Die Apoptose ist ein mehrstufiger Mechanismus, der einem physiologischen Selbstmord der Zelle gleich kommt. Wenn die Funktion von p53 durch eine Mutation im Gen eingeschränkt oder aufgehoben ist, können genetisch geschädigte Zellen nicht mehr aussortiert werden und so können sich im Laufe von mehreren Zellzyklen genetische Schäden anreichern.

In normalen Geweben wird p53 nur in geringer Menge exprimiert, so dass es mit immunhistologischen Mitteln in der Regel nicht nachweisbar ist. Wenn allerdings eine Punktmutation im p53-Gen vorhanden ist, die die Funktion des Proteins einschränkt, reichert sich das defekte Protein im Kern an. Es kann dann immunhistologisch nachgewiesen werden. Punktmutationen des p53-Gen kommen in malignen Tumoren unterschiedlicher Histogenese sehr häufig vor. Verwertbar als Malignitätskriterium ist eine kräftige nukleäre Expression in nahezu allen Tumorzellen. Nur ein solches Färbemuster lässt auf eine zugrunde liegende Punktmutation schließen.

Die Färbung für p53 hat nur bei bestimmten Fragestellungen ein besonderes Gewicht. Bei Biopsaten aus der Region der Papilla Vateri sind adenomatöse Läsionen mit einer Expression von p53 als schwerwiegender einzuschätzen und können auf eine bereits erfolgte maligne Entartung hinweisen. Auch bei der Beurteilung von Dysplasien einer Barrett-Mukosa kommt dem Färbeergebnis für p53 ein relatives Gewicht bei der Dignitätsbestimmung zu.